분야
hwp● 크로마토 그래피의 기본원리
• 정지상과 이동상
• 크로마토그램과 상대이동속도에 따른 띠 넓어짐의 영향
• 크로마토그래피서의 분배비
• 머무름 시간
• 머무름 시간과 분배비 사이에 관계
• 용량인자
• 선택인자
● 고성능 액체 크로마토그래피의 원리
• 액체크로마토그래피에서 단높이에 대한 충전입자의 크기와 흐름속도의 영향
• 고성능 액체 크로마토그래피의 기기
① 이동상 저장용기와 용매처리계
② 펌프계
③ 시료주입계
④ HPLC의 컬럼
⑤ 검출기
※ 결과분석
-고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)
● 크로마토 그래피의 기본원리
크로마토그래피란 혼합물의 성분들이 기체 또는 액체 이동상에 의해 정지상을 통해 지나가는 속도에 따라 분리되는 기술이다. 보통의 액체크로마토그래피에서 입자를 더욱 작게 하고, 가는 분리관을 사용해서 알맞은 압력을 가하여(입자를 작게 하면 액체의 통과가 느려지므로) 용매를 흘리면, 기체크로마토그래피와 같은 속도로, 또한 뛰어난 분리기능을 얻을 수 있다. 화합물 중에는 충분히 휘발하지 못하는 물질이나 컬럼을 통과할 수 없는 물질, 그리고 물질이 분리조건하에서 열적으로 불안정하거나 열적 분해를 일으키는 물질이 많기 때문에 기체 크로마토그래피에 의한 분리는 약 20%에 지나지 않는다. 고성능 액체 크로마토그래피는 시료의 휘발성이나 열적 안정성에 제한받지 않고, 거대분자와 이온화학종, 불안정한 천연물질 고분자물질과 다른 큰 분자량을 가지는 다중 작용기의 다양한 화합물을 분리할 수 있다.
• 정지상과 이동상
용리란 시료성분이 들어있지 않은 용매를 가하여 컬럼을 통해 용질을 씻어내는 것을 말한다. 용매에 녹인 시료를 충전된 컬럼에 투입하고 추가적으로 시료가 없는 용매를 지속적으로 가해준다. 이런식으로 가해지는 용매를 이동상이라고 한다. 그리고 지속적인 용매의 투입으로 시료는 컬럼 내에서 이동하게 된다. 이때 컬럼내에 충전물에 시료의 용질이 흡착되어 속도의 차이가 생기게 되고 이 시료를 잡아주는 움직이지 않는 물질을 정지상이라고 한다. 용질의 이동은 이동상 속에서만 일어나기 때문에 용질의 평균 이동속도는 용질이 이동상 속에서 보내는 시간의 분율에 의존한다.
